TDP43陰性封入体に含まれるDPRタンパク質

C9orf72患者における特徴的なTDP43陰性封入体に含まれるDPRタンパク質。アフィニティー精製済みのDPR特異的抗体(GA、GP、およびGR)を用いた免疫組織化学的分析により、ポリGA、ポリGP、およびポリGR封入体は、C9orf72変異を伴うFTLD/ALS患者におけるp62陽性凝集体に類似することが明らかとなった(表S1と比較)。小脳顆粒細胞層における点状および糸状の封入体(CBL-GL)(A～E)。海馬アンモン角領域2および3(CA2とCA3)における星形の細胞質内封入体(F～I)と点状の核内封入体(J)。歯状回の顆粒細胞層(DG-GL)と小脳分子層(CBL-ML)における混合形態の封入体(KおよびL)。患者と対照群において、ポリGR抗体により核と細胞質がわずかに染色した。スケールバー、20μm。抗GAと抗GPの特異性は、組換え抗原を用いたプレインキュベーション実験で確認された(図.S3、A～F)。ポリGR抗原はそれ自体が組織に直接結合するため(図.S3、G～K)、抗GRの分析は免疫ブロット実験でのみ可能であった(図.1A)。(M～O) 抗体を用いた蛍光二重染色法では、C9orf72 FTLD/ALS患者TJ-1におけるDPR凝集体の組成が明らかとなった。リン酸化TDP43とDPRタンパク質の共局在化は確認されなかった(図.S4)。スケールバー、10μm。

DPR proteins form the characteristic TDP-43-negative inclusions in
C9orf72 patients. Immunohistochemistry with affinity-purified DPR-specific
antibodies (GA, GP, and GR) reveals poly-GA, poly-GP, and poly-GR inclusions
resembling the p62-positive aggregates in FTLD/ALS patients with
C9orf72 mutation (compare table S1). Dotlike and threadlike inclusions in
cerebellar granular layer (CBL-GL) (A to E). Star-shaped cytoplasmic (F to I)
and dot-like intranuclear (J) inclusions in hippocampal cornu ammonis regions
2 and 3 (CA2 and CA3). Inclusion of mixed morphology in dentate
gyrus granular layer (DG-GL) and cerebellar molecular layer (CBL-ML) (K and
L). In patients and controls, poly-GR antibodies additionally showed faint
nuclear and cytoplasmic staining. Scale bars, 20 mm. Anti-GA and anti-GP
specificity was confirmed by preincubation experiments with recombinant
antigens (fig. S3, A to F). Validation of anti-GR was only possible by immunoblot
experiments (Fig. 1A) because the poly-GR antigen itself bound to the
tissue directly (fig. S3, G to K). (M to O) Double immunofluorescence
reveals composition of DPR aggregates in C9orf72 FTLD/ALS patient TJ-1. No
colocalization of DPR proteins was observed with phospho-TDP-43 (fig. S4).
Scale bars, 10 mm.